PM2.5 標(biao)準品 SRM1649b實驗(yan)分析(xi)方法(fa)

PM2.5 標(biao)準品 SRM1649b相(xiang)關(guan)實驗(yan)分析(xi)方法(fa):

1.多(duo)環(huan)芳烴化(hua)合(he)物(wu)對(dui)表(biao)皮(pi)真皮(pi)細(xi)胞毒性效應分(fen)析(xi):永生(sheng)化(hua)的皮(pi)膚(fu)角質(zhi)形(xing)成(cheng)細(xi)胞 HaCaT 細(xi)胞和皮膚(fu)成纖(xian)維細(xi)胞,NHDF 細(xi)胞為研究(jiu)對(dui)象，以(yi)國際(ji)準品空(kong)氣顆粒(li)性汙(wu)染(ran)物(wu)多(duo)環(huan)芳烴化(hua)合(he)物(wu) SRM1649b 潯(xun)出(chu)液(ye)為刺(ci)激(ji)物(wu)。研(yan)究(jiu)不同時間條件下(xia)(0 小時、6小 時、12小時、24小時，36 小時，小時)不同濃度(du) SRM1649b 對(dui) HacaT 細(xi)胞和 NHDF 細(xi)胞增殖(zhi)活性的影響。傳(chuan)代 HacaT 細(xi)胞和 NHDF 細(xi)胞，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)有 70-80%的紐(niu)融合(he)時用(yong)於(yu)實驗(yan)，吸(xi)去(qu)原(yuan)培養液，加入專(zhuan)用培(pei)養基(ji)，稀釋 SRM1649b，使(shi)其(qi)終濃度(du)為(wei)(0、50、100、200、400ug/mL)，在不同濃度(du)，不同時條件下(xia)避(bi)光(guang)孵(fu)育(yu)，用 CCK8 法(fa)檢測不同時間點(dian)和(he)濃度(du)孵(fu)育(yu) SRM1649b 對 HaCaT 細(xi)胞和 NHDF 細(xi)胞增殖(zhi)活性的影響; 從而(er)探索出(chu)不同濃度(du)不同時間點(dian) SRM1649b 浸(jin)出(chu)液(ye)對 HaCaT 及(ji) NHDF 細(xi)胞生(sheng)存(cun)率(lv) 的影響並(bing)選(xuan)擇適宜的實驗(yan)濃度(du)。

2.采用流式(shi)細(xi)胞術(shu)檢測PM2.5 標(biao)準品 SRM1649b 對(dui) HaCaT 和(he) NHDF 的細(xi)胞周(zhou)期，及(ji)雕(diao)亡(wang)的影響。 采用細(xi)胞免疫熒(ying)光(guang)法(fa)觀塞(sai) 空(kong)氣顆粒(li)性汙(wu)染(ran)物(wu)多(duo)環(huan)芳烴合(he)物(wu) SRM1649b 浸(jin)出(chu)液(ye)刺(ci)激(ji)前後(hou) HaCaT 和(he) NHDF 細(xi)胞內芳香(xiang)族化(hua) 合(he)物(wu)受(shou)體(ti) AhR 的分(fen)布變(bian)化(hua);

3.用(yong)實時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 方法(fa)檢測各濃度(du)實驗(yan)組 HacaT 和 NHDF 細(xi)胞中基(ji)質(zhi)金(jin)屬 蛋(dan)白(bai)酶 MMP1，MMP3，MMP9 的 mRNA 表(biao)達(da)情況(kuang)。用(yong)Western-blot 方法(fa)檢測各濃度(du)實驗(yan) 組 HaCaT 和 NHDF 細(xi)胞中基(ji)質(zhi)金(jin)屬蛋(dan)白(bai)酶 MMP1 蛋(dan)白(bai)表達(da)情況(kuang)。用(yong) ELISA 法(fa)檢測基(ji)質(zhi) 金(jin)屬蛋(dan)白(bai)酶

MMP1 蛋(dan)自的細(xi)胞外分(fen)泌(mi)情況(kuang):

4.實時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 和(he) Western-blot 方法(fa)檢測 PAHS(SRM1649b 浸出(chu)液(ye))與受 體(AhR)結(jie)合(he)後引(yin)起(qi)的胞(bao)漿及(ji)核(he)內(nei)下(xia)遊(you)靶基(ji)因(yin)的變(bian)化(hua)括(kuo) ERK1/2, c-Jun 等調(tiao)控(kong) 分子(zi)的磷(lin)酸(suan)化(hua)水(shui)平(ping)，以(yi)及(ji) CYP1A1 等(deng)下(xia)遊(you)靶基(ji)因(yin)的 mRNA 表(biao)達(da)水(shui)平(ping):5.空(kong)氣顆粒(li)性汙(wu)染(ran)物(wu)多(duo)環(huan)芳烴化(hua)合(he)物(wu) SRM1649b分(fen)析(xi)加入 AhR 受體(ti)拮(jie)抗劑後對 HaCaT 和(he) NHDF中 MMP1，CYP1A1 等表(biao) 達的影響。

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