NIBSC89/548介(jie)白(bai)素(su)6該如(ru)何使(shi)用(yong)？

　　NIBSC89/548介(jie)白(bai)素(su)6是(shi)WHO規(gui)定的用(yong)於(yu)IL-6檢測的國(guo)際(ji)標(biao)準(zhun)品(pin)。在(zai)實(shi)驗(yan)中(zhong)，它為各種(zhong)檢測方法(fa)提(ti)供(gong)了壹個(ge)準(zhun)確(que)、可(ke)靠(kao)的參(can)照基(ji)準(zhun)。例(li)如(ru)在(zai)使(shi)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體夾(jia)心酶聯(lian)免(mian)疫吸附法(fa)(ELISA)測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)中(zhong)人(ren)白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)-6(IL-6)的水平時(shi)，該標(biao)準(zhun)品(pin)可(ke)用(yong)於(yu)構建(jian)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)。具(ju)體來(lai)說(shuo)，向(xiang)預先包(bao)被(bei)了人白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)-6單克(ke)隆抗(kang)體的酶標(biao)孔中(zhong)加(jia)入(ru)不同(tong)稀(xi)釋度的NIBSC89/548介(jie)白(bai)素(su)6以及(ji)其(qi)他(ta)待測(ce)樣(yang)本(ben)，然後通過壹系(xi)列反應(ying)來(lai)定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)IL-6的含(han)量(liang)。
 

　　基(ji)於抗(kang)原抗(kang)體的特(te)異(yi)性識(shi)別(bie)原理(li)，NIBSC89/548中(zhong)的IL-6分(fen)子(zi)能(neng)夠(gou)與特(te)定(ding)的抗(kang)IL-6單克隆抗(kang)體發生(sheng)準(zhun)確(que)結(jie)合(he)。這(zhe)種(zhong)特異性結合(he)保證了在(zai)復(fu)雜(za)的生(sheng)物(wu)樣(yang)品(pin)環(huan)境(jing)中(zhong)，只(zhi)有(you)目(mu)標(biao)IL-6會(hui)被(bei)有(you)效(xiao)捕獲和(he)檢測，從(cong)而排(pai)除其(qi)他(ta)幹(gan)擾(rao)物(wu)質的影(ying)響，提(ti)高(gao)檢測的準(zhun)確(que)性(xing)。
 

　　在(zai)ELISA等(deng)檢測方法(fa)中(zhong)，結(jie)合(he)後的復(fu)合(he)物(wu)會(hui)進(jin)壹(yi)步(bu)引發後續(xu)的信(xin)號轉換(huan)和(he)放大(da)過程(cheng)。通常會(hui)引(yin)入(ru)酶標(biao)記的二(er)抗(kang)或(huo)其(qi)他(ta)示(shi)蹤物(wu)質，當底(di)物(wu)存(cun)在(zai)時(shi)，會(hui)產(chan)生(sheng)可觀(guan)測的信(xin)號變化(hua)，如(ru)顏(yan)色(se)改變(bian)或(huo)熒(ying)光(guang)發射等(deng)。通過對(dui)這(zhe)些信號強度的測(ce)量(liang)，可以間(jian)接反映出樣(yang)品(pin)中(zhong)IL-6的濃(nong)度。
 

　　NIBSC89/548介白(bai)素(su)6的使(shi)用(yong)步(bu)驟(zhou)：
 

　　1.樣(yang)本(ben)準(zhun)備(bei)：收集待測(ce)樣(yang)本(ben)，如(ru)血清(qing)、血漿或(huo)其(qi)他(ta)體液(ye)。確保(bao)樣(yang)本(ben)采集過(guo)程(cheng)符合(he)標(biao)準(zhun)程(cheng)序(xu)，避免(mian)汙(wu)染和(he)溶血等(deng)情況(kuang)影(ying)響結(jie)果(guo)準(zhun)確(que)性(xing)。
 

　　2.試(shi)劑與耗材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)好(hao)所需(xu)的試(shi)劑盒(he)組件，包(bao)括包(bao)被(bei)有(you)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體的微(wei)孔板、標(biao)準(zhun)品(pin)、檢測抗(kang)體、酶結合(he)物(wu)、底物(wu)溶液(ye)以及(ji)洗(xi)滌液(ye)等(deng)。同(tong)時(shi)檢查(zha)所有(you)試(shi)劑是否(fou)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內且儲存(cun)條件適宜。
 

　　3.加(jia)樣(yang)與(yu)孵(fu)育(yu)：將適當稀(xi)釋後的樣(yang)本(ben)加(jia)入(ru)到(dao)預先包(bao)被(bei)了抗(kang)IL-6單克隆抗(kang)體的微(wei)孔中(zhong)，並(bing)設置(zhi)壹(yi)系(xi)列已知(zhi)濃(nong)度的標(biao)準(zhun)點(dian)以建(jian)立標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)。然後進(jin)行第壹次(ci)溫(wen)育，使(shi)樣(yang)本(ben)中(zhong)的IL-6與(yu)固(gu)相上(shang)的抗(kang)體充(chong)分(fen)結(jie)合(he)。
 

　　4.洗(xi)滌去除(chu)未結(jie)合(he)成分(fen)：使(shi)用(yong)特(te)定的洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)清洗(xi)微(wei)孔板，去(qu)除(chu)未(wei)結合(he)的物(wu)質和(he)其(qi)他(ta)幹(gan)擾(rao)因素。
 

　　5.加(jia)入(ru)檢測抗(kang)體與(yu)二次(ci)孵育：向(xiang)每個孔中(zhong)添(tian)加(jia)標(biao)記過的檢測抗(kang)體(通常是HRP標(biao)記)，再次進(jin)行溫(wen)育，讓檢測抗(kang)體與(yu)已結(jie)合(he)在(zai)板上(shang)的目(mu)標(biao)分(fen)子(zi)相(xiang)互作(zuo)用(yong)。
 

　　6.顯色(se)反應(ying)：加(jia)入(ru)底物(wu)溶液(ye)啟(qi)動顯色(se)反應(ying)，通常使(shi)用(yong)的是(shi)TMB(四(si)甲基(ji)聯(lian)苯(ben)胺(an))。在(zai)HRP酶催(cui)化(hua)下(xia)，TMB會(hui)轉(zhuan)變(bian)為藍(lan)色(se)產(chan)物(wu)，顏(yan)色(se)的深(shen)淺(qian)與(yu)樣(yang)本(ben)中(zhong)IL-6的含(han)量(liang)成正比(bi)。
 

　　7.終止反應(ying)並(bing)讀數：通過加(jia)入(ru)酸性終(zhong)止液(ye)停止(zhi)顯色(se)反應(ying)，隨(sui)後使(shi)用(yong)酶標(biao)儀(yi)測量(liang)各孔的光(guang)密度值(zhi)(OD值(zhi))。根(gen)據標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)計(ji)算(suan)出樣(yang)品(pin)中(zhong)IL-6的實(shi)際(ji)濃度。