SRM972a維生(sheng)素-D標(biao)準物(wu)質(zhi)(美(mei)國NIST)

SRM972a維生(sheng)素-D標(biao)準物(wu)質(zhi)(美(mei)國NIST)旨在用(yong)作對(dui)確定人血(xue)清中維生(sheng)素-D代謝(xie)物的(de)物(wu)質(zhi)濃(nong)度(du)的(de)方(fang)法(fa)進(jin)行嚴(yan)格(ge)評(ping)估(gu)的(de)準(zhun)確度控(kong)制。SRM972a維(wei)生(sheng)素-D標(biao)準物(wu)質(zhi)還(hai)可用(yong)作(zuo)質(zhi)量(liang)保(bao)證(zheng)工具，用於(yu)為這些(xie)成分(fen)的(de)內(nei)部控(kong)制材(cai)料(liao)分(fen)配(pei)值(zhi)。SRM 972a由(you)四個(ge)小(xiao)瓶(1到4級)冷凍(dong)血(xue)清組成，其中含有(you)不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)的(de)25-羥(qiang)基維生(sheng)素-D和24r，25-二羥(qiang)基維生(sheng)素-D3。

測(ce)量血(xue)清中的(de)總(zong)25(OH)D濃(nong)度(du)，即25-羥基維(wei)生(sheng)素-D2和25-羥基(ji)維生(sheng)素，D3[25(OH)D3]的(de)總(zong)和，通常(chang)被(bei)認(ren)為是維生(sheng)素-D狀(zhuang)態(tai)的(de)可(ke)靠指標(biao).。3-環(huan)氧-25-羥基維(wei)生(sheng)素-D3[3-epi-25(OH)D3]的(de)濃(nong)度(du)通常(chang)不(bu)包(bao)括在(zai)總(zong)25(OH)D中，但該(gai)代謝(xie)物對(dui)某(mou)些維(wei)生(sheng)素-D代謝(xie)物測(ce)定構(gou)成潛在的(de)測(ce)量幹(gan)擾(rao)24r，25-二羥(qiang)基維生(sheng)素-D3的(de)測(ce)量血(xue)清中的(de)含量被(bei)認(ren)為是分解(jie)代謝(xie)的(de)標(biao)誌(zhi)物(wu)和腎臟疾(ji)病(bing)的(de)指(zhi)標。每瓶(ping)SRM 972a含有(you)大(da)約(yue)1 mL血(xue)清。

SRM972a維(wei)生(sheng)素-D標(biao)準物(wu)質(zhi)(美(mei)國NIST)的(de)四(si)個水(shui)平中的(de)每(mei)壹(yi)個(ge)都(dou)以25(OH)D的(de)特(te)定目標水(shui)平制(zhi)備。雖(sui)然某(mou)些測(ce)量方(fang)法(fa)可能適(shi)用(yong)SRM 972a的(de)四(si)個級別(bie)中的(de)每(mei)壹(yi)個(ge)，但要(yao)認(ren)識(shi)到某(mou)些方(fang)法(fa)可能不(bu)適(shi)用(yong)於(yu)某(mou)些級(ji)別。個(ge)人用戶將需(xu)要評(ping)估(gu)哪(na)個(ge)級別(bie)或(huo)哪(na)些(xie)級別(bie)極(ji)適(shi)合(he)他(ta)們(men)的(de)特(te)定需求(qiu)。

SRM972a維生(sheng)素-D標(biao)準物(wu)質(zhi)(美(mei)國NIST)中 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3 濃(nong)度(du)的(de)賦(fu)值(zhi)基(ji)於(yu) NIST (ID) 兩種(zhong)分析(xi)方(fang)法(fa)提(ti)供的(de)結(jie)果的(de)組合(he)-LC-MS 和 ID-LC-MS/MS）以及來自 CDC 的(de)兩(liang)個 ID-LC-MS/MS 分析(xi)程序。 24R、25(OH)2D3 濃(nong)度(du)的(de)賦(fu)值(zhi)基(ji)於(yu) NIST 的(de) ID-LC-MS/MS 結(jie)果。通過(guo) ID-LC-MS (NIST) 測(ce)量(liang) 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3：血(xue)清 (450 mg) 和含有(you) 2 H6-25( OH)D3、2 H3-25(OH)D2 和 2 H3-3-epi-25(OH)D3 在玻璃管中混合(he)，沈澱(dian)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，將代謝(xie)物萃取(qu)到己烷(wan)中兩次(ci)。合(he)並己(ji)烷相並在(zai)氮(dan)氣(qi)下(xia)在(zai)40°C蒸(zheng)發(fa)至(zhi)幹(gan)。殘(can)留物用(yong)甲醇(chun)復(fu)溶，渦流(liu)混合(he)。使(shi)用 LC-MS 和 (1) Ascentis Express F5 五氟苯(ben)丙基(ji)色(se)譜柱(zhu) (Supelco, Bellefonte, PA) 和 (2) Zorbax SB-CN 氰丙基(ji)固(gu)定相色(se)譜柱(zhu) (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) 分析(xi)提(ti)取(qu)物(wu)。五氟苯(ben)丙基(ji)色(se)譜柱(zhu)的(de)分(fen)析(xi)在等度流(liu)動相為 26% 水(shui)和 74% 甲醇(chun)，流(liu)速(su)為 0.8 mL/min。所有(you)溶劑組成均(jun)以百分比表(biao)示體積(ji)分數。柱溫(wen)保(bao)持在(zai) 15 °C。在(zai)運(yun)行結束(shu)時(shi)將梯度梯度加(jia)入到 100% 甲醇(chun)中，以洗(xi)脫(tuo)保留的(de)基(ji)質(zhi)成分(fen)。在等度條件(jian)下(xia)對(dui)氰丙基(ji)色(se)譜柱(zhu)進(jin)行分析(xi)，流動相為 33% 水(shui)和 67% 甲醇(chun)（SRM 972a 的(de) 1、2 和 4 級）或(huo) 34% 水(shui)和 66% 甲醇(chun)（3 級(ji)），流(liu)速(su)為1.0 毫升(sheng)/分(fen)鐘。在運(yun)行結束(shu)時(shi)將梯度梯度加(jia)入到 100% 甲醇(chun)中，以洗(xi)脫(tuo)保留的(de)基(ji)質(zhi)成分(fen)。柱溫(wen)保(bao)持在(zai) 45 °C。

表(biao)1提(ti)供了25(OH)D3、25(OH)D2、3-epi-25(OH)D3和24r、25(OH)2D3的(de)認(ren)證(zheng)值(zhi).認(ren)證(zheng)值(zhi)是壹(yi)個(ge)值(zhi)對(dui)其準確性的(de)信(xin)心(xin)較高，因為所有(you)已(yi)知(zhi)或可(ke)疑的(de)偏(pian)差來源都已(yi)被(bei)調查(zha)或(huo)考(kao)慮在內[1]。認(ren)證(zheng)值(zhi)25(OH)D3、25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3是基於(yu)同位(wei)素稀(xi)釋(shi)液相色(se)譜質(zhi)譜(pu)(ID-LC-MS)[2]和同位(wei)素稀(xi)釋(shi)液的(de)結(jie)果壹(yi)致(zhi)色(se)譜串聯質(zhi)譜(pu)(ID-LC-MS/MS)[3]在(zai)NIST執(zhi)行的(de)程序，以及在佐治(zhi)亞州(zhou)亞特(te)蘭大(da)的(de)疾(ji)病(bing)控(kong)制和預防中心(xin)(CDC)執(zhi)行的(de)兩(liang)種不(bu)同(tong)的(de)ID-LC-MS/MS程序[4.5]。24r、25(OH)2D3的(de)認(ren)證(zheng)值(zhi)基(ji)於(yu)使(shi)用ID-LC-MS/MS進(jin)行的(de)參考(kao)測(ce)量(liang)程序的(de)結(jie)果NIST[6]。NIST和CDCID-LC-MS/MS方(fang)法(fa)被(bei)檢(jian)驗醫學(xue)可(ke)追溯(su)性聯合(he)委員(yuan)會(JCTLM)[7，8]認(ren)定(ding)為高階參考(kao)測(ce)量(liang)程序。

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表(biao)2提(ti)供了25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的(de)參考(kao)值(zhi)。參考(kao)值(zhi)是未經認(ren)證(zheng)的(de)值(zhi)，是根據(ju)現有(you)數據(ju)對(dui)真實值(zhi)的(de)優(you)良估計(ji);然而(er)，這(zhe)些(xie)值(zhi)不(bu)符合(he)NIST的(de)認(ren)證(zheng)標準，並且(qie)提(ti)供了相關(guan)的(de)不(bu)確定性，這些不(bu)確定性可能僅(jin)反(fan)映測(ce)量精度，可能不(bu)包(bao)括所(suo)有(you)不(bu)確定性來源，或(huo)者(zhe)可(ke)能反(fan)映(ying)多(duo)種分(fen)析(xi)方(fang)法(fa)之(zhi)間(jian)缺(que)乏(fa)足(zu)夠的(de)統計(ji)壹(yi)致(zhi)性(xing)[1]。25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的(de)參考(kao)值(zhi)基(ji)於(yu)在NIST和ID-LC-執行的(de)ID-LC-MS和ID-LC-MS/MS程序結(jie)果的(de)壹(yi)致(zhi)性(xing)。CDC提(ti)供的(de)MS/MS.結(jie)果。

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