SRM972a標(biao)準(zhun)參考(kao)物質(zhi)的(de)應(ying)用—維生(sheng)素(su)-D及(ji)25-羥(qiang)基維生(sheng)素(su)-D測(ce)定(ding)

功能性(xing)的維生(sheng)素(su)-D主(zhu)要(yao)包括(kuo)維(wei)生(sheng)素(su)-D3和維(wei)生(sheng)素(su)-D2。維(wei)生(sheng)素(su)-D 除(chu)了具有(you)傳統(tong)意(yi)義上的骨骼(ge)效(xiao)應，它(ta)還(hai)有(you)著廣泛(fan)的(de)非(fei)骨(gu)骼(ge)效(xiao)應，與(yu)心血管(guan)疾(ji)病、免(mian)疫(yi)疾(ji)病、糖(tang)尿病、腫(zhong)瘤(liu)等疾(ji)病密(mi)切相(xiang)關(guan)。25-羥(qiang)基維生(sheng)素(su)-D（25OHD）測(ce)定(ding)是衡(heng)量維(wei)生(sheng)素(su)-D 營養狀(zhuang)態的(de)最佳(jia)指(zhi)標(biao)。根(gen)據測(ce)定(ding)原理不(bu)同，目(mu)前(qian) 25OHD 的(de)測(ce)定(ding)方法(fa)可分(fen)為(wei)多(duo)種(zhong)，液(ye)相(xiang)色譜-串聯質(zhi)譜(pu)法(fa)（LC-MS/MS）具有(you)特異性強、準確(que)性(xing)高(gao)的(de)特(te)點，被(bei)認(ren)為(wei)是(shi)評(ping)價(jia)維(wei)生(sheng)素(su)-D 營養狀(zhuang)況(kuang)的“金標(biao)準(zhun)"測定(ding)法，美(mei)國NIST的(de)SRM972a標(biao)準(zhun)參考(kao)物質(zhi)用(yong)於測定(ding)的校(xiao)準品。

通過測(ce)定(ding) 25OHD 濃(nong)度(du)來(lai)評價(jia)維(wei)生(sheng)素(su)-D 水平，現(xian)有(you)多種(zhong)方(fang)法用於臨床 25OHD的測(ce)定(ding)，根據(ju)方法原理，可(ke)分(fen)為(wei)酶(mei)免(mian)疫(yi)分(fen)析法和色(se)譜法(fa)。由於所有(you)的維(wei)生(sheng)素(su)-D羥(qiang)化物都(dou)可(ke)能發(fa)生(sheng)抗體(ti)抗原結合(he)反(fan)應，因此(ci)酶免疫(yi)分(fen)析法只(zhi)能測(ce)定(ding) 25OHD 總(zong)量，無(wu)法同時測定(ding) 25OHD2和 25OHD3的(de)濃(nong)度(du)。現(xian)有(you) 25OHD 的色(se)譜(pu)分(fen)析方法包(bao)括(kuo)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色譜法（HPLC）和液(ye)相(xiang)色譜-串聯質(zhi)譜(pu)法(fa)（LC-MS/MS）。由於可分(fen)離並檢測(ce)不(bu)同的(de)分(fen)析物，色(se)譜(pu)法可(ke)區(qu)分(fen)並能分(fen)別(bie)定(ding)量 25OHD2和 25OHD3。

色(se)譜法(fa)可將 25OHD2、25OHD3與(yu)維生(sheng)素(su)-D其(qi)他代(dai)謝物實(shi)現有(you)效(xiao)分(fen)離，提高(gao)檢(jian)測(ce)特(te)異性。HPLC 是(shi)早期應(ying)用(yong)較(jiao)多的色譜法之壹(yi)，可(ke)同時檢測(ce) 25OHD2和 25OHD3，具有(you)良好(hao)的精(jing)密(mi)度(du)，與(yu) LC-MS/MS 法結(jie)果壹(yi)致(zhi)性(xing)較(jiao)好(hao)。與(yu)免疫(yi)法(fa)相(xiang)比，HPLC的相(xiang)對(dui)不(bu)確(que)定(ding)度(du)小，分(fen)析成(cheng)本更低(di)，甚(shen)至還(hai)有(you) HPLC 商(shang)業試劑(ji)盒(he)用於 25OHD的測(ce)定(ding)。但是(shi) HPLC 的不(bu)足之處(chu)是(shi)分(fen)析時間長(chang)、檢(jian)測通(tong)量小、靈敏(min)度(du)低(di)、所(suo)需樣品量大(da)，不(bu)適合臨床應用(yong)，已(yi)經*被(bei) LC-MS/MS 所(suo)替(ti)代。

LC-MS/MS 是色(se)譜法中最為(wei)常用(yong)的(de) 25OHD 檢測(ce)方法，樣品經處(chu)理後采(cai)用(yong)液(ye)相(xiang)色譜分(fen)離，檢測器為(wei)串(chuan)聯(lian)質(zhi)譜(pu)儀，在(zai)多反(fan)應監(jian)測掃描(miao)模(mo)式下(xia)，實(shi)現分(fen)子離子和碎(sui)片(pian)離(li)子(zi)兩次(ci)質(zhi)量選擇，可同時檢測(ce) 25OHD2和 25OHD3，具有(you)非(fei)常高(gao)的(de)檢(jian)測(ce)特(te)異性，被(bei)認為(wei)是(shi)“金標(biao)準(zhun)"的檢(jian)測(ce)技(ji)術。LC-MS/MS 更加契合(he)現代(dai)臨(lin)床實(shi)驗室的工作(zuo)流程(cheng)，可(ke)*臨床檢測(ce)方法(fa)準(zhun)確(que)性(xing)、特異性、檢(jian)測通量的(de)要求。25OHD 的(de) LC-MS/MS檢(jian)測方(fang)法(fa)都是(shi)實(shi)驗室內部開發(fa)的(de)，不(bu)同的(de)實(shi)驗室采(cai)用(yong)不(bu)同的(de)標(biao)準(zhun)品來源、貯備液(ye)配制、樣(yang)品處理方(fang)法等(deng)，影響(xiang)了室間可比性。

而(er)采(cai)用(yong)共(gong)同的(de)校(xiao)準品、參加英國(guo)維(wei)生(sheng)素(su)-D 代(dai)謝物室間質(zhi)評(ping)計(ji)劃(hua)(DEQAS)、美(mei)國病理學家協(xie)會（CAP）的能力(li)測試等(deng)措(cuo)施有(you)助(zhu)於改(gai)進方(fang)法(fa)間、實(shi)驗室間測定(ding)結果的可比(bi)性(xing)：美(mei)國標(biao)準(zhun)技(ji)術研(yan)究(jiu)（NIST）所提供(gong)血清(qing) 25OHD2和 25OHD3的(de)SRM972a標(biao)準(zhun)參考(kao)物質(zhi)，采(cai)用(yong) LCMS/MS 測(ce)定(ding)靶值(zhi)。2009 年 DEQAS 有(you) 35 國家、670 家實(shi)驗室參加，目前(qian)我(wo)國尚無相(xiang)應的 25OHD 的室間質(zhi)評(ping)計(ji)劃(hua)。