IgG1κ 單克隆抗體 標(biao)準(zhun)物質（RM 8671）

       美國(guo)NIST的(de) IgG1κ 單克隆抗體 標(biao)準(zhun)物質（RM 8671）主(zhu)要用(yong)於評估(gu)確(que)定單克隆抗體的(de)物理(li)化(hua)學(xue)和生(sheng)物物理(li)屬(shu)性的(de)方法(fa)的(de)性能。它還(hai)為(wei)開發用(yong)於治療(liao)性蛋白(bai)質表征(zheng)的(de)新技術提供了(le)壹個具(ju)有代(dai)表性(xing)的(de)測試(shi)分子(zi)。此(ci)外(wai)IgG1κ 單克隆抗體 標(biao)準(zhun)物質（RM 8671）可用(yong)於多(duo)種(zhong)用(yong)途，包(bao)括系(xi)統適用(yong)性(xing)測試(shi)、確定方法(fa)或儀器(qi)性(xing)能和可變(bian)性、比(bi)較(jiao)變(bian)化(hua)的(de)分析(xi)測試(shi)方法(fa)以及協助(zhu)方法(fa)鑒定。

包(bao)裝規(gui)格(ge)：

         RM8671由(you)壹個內螺(luo)紋(wen)聚(ju)丙烯(xi)冷凍(dong)管(guan)組成，其(qi)中(zhong)含(han)有 800 µL 10 mg/mL NIST IgG1κ 單克隆抗體 (NISTmAb)，溶於 12.5 mmol/L L-組氨(an)酸、12.5 mmol/L L-組氨(an)酸 HCl (pH 6.0) ）。

        美(mei)國NIST的(de)gG1κ 單克隆抗體 標(biao)準(zhun)物質（RM 8671）是壹種在鼠(shu)懸(xuan)浮培(pei)養(yang)中(zhong)表達(da)的(de)重組人源(yuan)化(hua) IgG1κ，並(bing)經過(guo)生物(wu)制藥行(xing)業標(biao)準(zhun)的(de)上遊和下(xia)遊純化(hua)，以去(qu)除工藝相關(guan)的(de)雜質(zhi)。它(ta)是通過(guo)鏈(lian)間和鏈(lian)內二硫鍵(jian)連(lian)接的(de)兩條輕(qing)鏈(lian)和兩條(tiao)重鏈(lian)亞基(ji)的(de)約 150 kDa 同源(yuan)二聚(ju)體(ti)。該(gai)分子(zi)具(ju)有高豐(feng)度的(de) N 末端(duan)焦谷(gu)氨(an)酰胺(an)化(hua)、C 末端(duan)賴氨(an)酸剪(jian)切(qie)和(he)重鏈(lian)糖基(ji)化(hua)。該(gai)蛋白(bai)質還(hai)具(ju)有低豐(feng)度的(de)翻(fan)譯後修飾(shi)，包(bao)括蛋氨(an)酸氧化(hua)、脫酰(xian)胺(an)和糖化(hua) [1-4]。這(zhe)些和(he)其他產品質量(liang)屬(shu)性在 ACS Symposium 系(xi)列中(zhong)針(zhen)對第(di)壹批臨(lin)時(shi)材(cai)料(liao)進行(xing)了(le)廣泛的(de)描述，在本(ben)文中(zhong)用(yong)作(zuo)主(zhu)要樣(yang)品 (PS) [5-7]。

有效期：非認證值(zhi)在規(gui)定的(de)測量(liang)不確定度內有效，直(zhi)到(dao) 2026 年(nian) 4 月(yue) 29 日(ri)。如果(guo)材料存(cun)儲(chu)或使(shi)用(yong)不當(dang)、損(sun)壞(huai)、汙(wu)染或以(yi)其他(ta)方式(shi)修(xiu)改，則(ze)賦(fu)值(zhi)無(wu)效。

非認證值(zhi)：NIST 非認證值(zhi)是(shi)基(ji)於當(dang)前(qian)可用(yong)信息(xi)的(de)最佳估(gu)計(ji)值(zhi)，從(cong) 1987 年(nian)到(dao) 2020 年(nian) 7 月(yue)被(bei)稱(cheng)為“參(can)考(kao)值(zhi)"或“信息(xi)值(zhi)"[8]。非認證值(zhi)適用(yong)於方法(fa)開發、方法(fa)協調(tiao)和(he)過(guo)程控(kong)制，但不提供對國際單位制 (SI) 或其(qi)他高階(jie)參(can)考(kao)系(xi)統的(de)計量溯(su)源(yuan)。

表 1 至表 5 中(zhong)提供了(le) IgG1κ 單克隆抗體 標(biao)準(zhun)物質（RM 8671）的(de)非認證值(zhi)。此(ci) RMIS 中(zhong)描述的(de)特定協議和結(jie)果(guo)的(de)全面(mian)擴(kuo)展可在參(can)考(kao)文獻 [9-13] 中(zhong)找到(dao)。質量(liang)濃(nong)度非認證值(zhi)：表 1 中(zhong)列出(chu)的(de)質量濃(nong)度值(zhi)基(ji)於在 280 nm 處(chu)測得(de)的(de)十進制衰減 D。十(shi)進制衰減 D 被(bei)計(ji)算為透射率的(de)負(fu)對數（以 10 為(wei)底(di)），它類似(si)於吸光度，除了(le)包(bao)含(han)對離開樣(yang)品的(de)輻射功率的(de)散射和發光效應(ying) [14]。 NISTmAb 的(de)濃(nong)度通過(guo)使用(yong) 1.42 mL · mg-1 · cm-1 [15,16] 的(de)理(li)論消光系(xi)數 (ε) 確定。該(gai)值(zhi)是(shi)根據 [16] 報告的(de)方法(fa)計算的(de)，並(bing)進壹步校(xiao)正(zheng)了(le) 0.977 [15] 的(de)聚(ju)糖(tang)質(zhi)量(liang)分(fen)數校(xiao)正(zheng)因(yin)子(zi)。可以(yi)在參(can)考(kao)文獻 [9] 中(zhong)找到(dao)分析(xi)方法(fa)的(de)詳(xiang)細信息(xi)以(yi)及(ji)對與此質(zhi)量(liang)濃(nong)度測量(liang)相關(guan)的(de)不確定性的(de)貢(gong)獻。

物理(li)化(hua)學(xue)非認證值(zhi)：IgG1κ 單克隆抗體 標(biao)準(zhun)物質（RM 8671）的(de)物理(li)化(hua)學(xue)屬(shu)性使(shi)用(yong)合格(ge)的(de)尺寸(cun)排(pai)阻(zu)色(se)譜(pu) (SEC)、毛(mao)細管十(shi)二烷基(ji)硫(liu)酸鈉電泳(yong) (CE-SDS)、毛細管(guan)區(qu)帶電泳(yong) (CZE) 和動態(tai)光散射 (DLS) 方法(fa)進行(xing)測量(liang) [10 ,11]。使用(yong)原始(shi)樣(yang)品 (PS) 對這(zhe)些分(fen)析(xi)測定進行(xing)了(le)鑒定，以建立(li)方法(fa)性能標(biao)準(zhun)。資格(ge)驗證活動以(yi) ICH Q2(R1) 方法(fa)驗證指南(nan)為模(mo)型(xing)，包(bao)括評估(gu)線(xian)性、檢測限 (LOD)/定量限 (LOQ)、範(fan)圍和(he)精(jing)密度（可重復性和壹些中(zhong)間精(jing)密度）。表 2、3、4 和(he) 5 中(zhong)提供的(de)物理(li)化(hua)學(xue)值(zhi)是(shi)通過(guo)使用(yong)每種合格(ge)方法(fa)（SEC、CE-SDS、DLS 和 CZE）分析(xi) Lot 14HB-D-002 來認定的(de)，同時(shi)用(yong)儀器(qi)認證 (IQ) 括起(qi)每個分析(xi)標(biao)準(zhun)和 PS 以確保系(xi)統適用(yong)性(xing)。 IQ 標(biao)準(zhun)和 PS 都需要(yao)通過(guo)從方法(fa)鑒定得出的(de)預(yu)定義方法(fa)性能標(biao)準(zhun)。可以(yi)在參(can)考(kao)文獻 [9-11] 中(zhong)找到(dao)分析(xi)方法(fa)的(de)詳(xiang)細信息(xi)以(yi)及(ji)對與測量(liang)相關(guan)的(de)不確定性的(de)貢(gong)獻。在參(can)考(kao)文獻 [9-13] 中(zhong)可以(yi)找到(dao)關(guan)於物理(li)化(hua)學(xue)測量(liang)的(de)特定協議和結(jie)果(guo)的(de)全面(mian)擴(kuo)展。

附(fu)加(jia)信息(xi)：包(bao)括流動成(cheng)像(xiang)分(fen)析(xi)和(he)肽圖(tu)鑒定測試(shi)在內的(de)附加(jia)物理(li)化(hua)學(xue)表征(zheng)方法(fa)也(ye)適用(yong)於 RM 8671，並(bing)在附(fu)錄(lu) A 中(zhong)報告。

儲(chu)存(cun)：RM 用(yong)幹冰(bing)運輸(shu)，運輸過(guo)程中(zhong)應(ying)保持冷凍(dong)狀(zhuang)態(tai)。材料(liao)應(ying)在收(shou)到(dao)後立(li)即在 -80 °C 下(xia)冷凍(dong)保(bao)存(cun)。對壹系(xi)列穩(wen)定性樣(yang)品進行(xing)了(le)評估(gu)，以(yi)確定最佳的(de)儲(chu)存(cun)條件，在該(gai)條件下，樣(yang)品可能(neng)會在給(gei)定的(de)方法(fa)中(zhong)保持其物(wu)理(li)化(hua)學(xue)性能(neng) [9]。在所有情(qing)況下，最(zui)好將材(cai)料(liao)儲(chu)存(cun)在 -80 °C。如(ru)果(guo)需要(yao)在 -80 °C 以(yi)外(wai)的(de)條件下制備和(he)/或儲(chu)存(cun)等分(fen)試(shi)樣(yang)，則在給(gei)定條件和某(mou)些(xie)預(yu)期用(yong)途下推薦的(de)最長儲(chu)存(cun)時間(jian)列於表 6。

處(chu)理(li)和使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)：應(ying)將小(xiao)瓶(ping)從 -80 °C 冰箱中(zhong)取出，在室溫下解(jie)凍(dong)約 30 分鐘或直(zhi)至沒(mei)有殘(can)留冰(bing)晶。壹旦解(jie)凍(dong)，小(xiao)瓶(ping)應(ying)輕(qing)輕(qing)倒置(zhi)五(wu)次(ci)，以減輕(qing)冷凍(dong)過(guo)程中(zhong)可能(neng)形(xing)成的(de)任何濃(nong)度梯度。然後，小(xiao)瓶(ping)應(ying)在微型(xing)離心機中(zhong)快速旋(xuan)轉(zhuan)，以沈(chen)澱任何可能(neng)仍(reng)粘(zhan)附(fu)在小(xiao)瓶(ping)蓋(gai)或內螺(luo)紋(wen)上的(de)溶液。壹旦打開，小(xiao)瓶(ping)內容(rong)物應(ying)立(li)即使(shi)用(yong)和(he)/或根據材料的(de)預(yu)期用(yong)途在表 6 中(zhong)列出(chu)的(de)預(yu)定義條件下儲(chu)存(cun)。可以(yi)通過(guo)轉(zhuan)移等(deng)分試樣(yang)並(bing)稀(xi)釋(shi)至適當(dang)體(ti)積來制備較(jiao)低濃(nong)度的(de)蛋白(bai)質溶液。 RM 不提供稀(xi)釋(shi)劑(ji)；然而(er)，可以(yi)使用(yong)含(han)水(shui)稀(xi)釋(shi)劑(ji)，例(li)如(ru)制劑緩(huan)沖(chong)液（12.5 mmol/L L-組氨(an)酸，12.5 mmol/L L-組氨(an)酸 HCl，pH 6.0）。 NIST 尚未(wei)在稀(xi)釋(shi)或濃(nong)縮條件下對材料(liao)的(de)溶解(jie)度和穩(wen)定性進行(xing)全面(mian)測試(shi)，因(yin)此(ci)可能(neng)不符合本(ben)文所述分析(xi)測定的(de)預(yu)期。